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分子實(shí)驗(yàn)室如何選擇核酸提取儀?
發(fā)布日期:2022/11/3 9:13:40

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的高速發(fā)展,以核酸雜交、核酸擴(kuò)增及核酸序列分析等為代表的分子診斷和檢測技術(shù)的重要作用日益凸顯。樣品前處理所花費(fèi)的時間占整個分析過程的60%,而檢測誤差的90%出現(xiàn)在前處理領(lǐng)域。核酸提取作為分子診斷實(shí)驗(yàn)的“第一步”,也是最關(guān)鍵的一步,其獲得的核酸質(zhì)量的優(yōu)劣直接影響到下游分子生物學(xué)試驗(yàn)的成敗。

國內(nèi)的二級醫(yī)院、三級醫(yī)院、疾控中心、第三方檢測等符合國家新冠檢測要求的機(jī)構(gòu),依然會不斷的接收到大量的新冠檢測需求。同時,已經(jīng)有很多省份出臺政策文件,進(jìn)行了全省范圍內(nèi)的醫(yī)院擴(kuò)建,特別是二級醫(yī)院。面對市場上五花八門的產(chǎn)品,如何選擇一款合適的核酸自動提取儀,就得細(xì)細(xì)分析。

1.核酸提取原理

1.1

采用離心柱法的儀器

離心柱法核酸提取儀主要采用離心機(jī)和自動移液裝置相結(jié)合的方法,通量一般在1-12個樣本,操作時間和手工提取差不多,并不能提高實(shí)際工作效率,且價格昂貴,不同型號儀器的耗材也不能通用,僅適合經(jīng)費(fèi)充足的大型實(shí)驗(yàn)室使用。

1.2

采用磁珠法的儀器

以磁珠為載體,利用磁珠在高鹽低PH值下吸附核酸,在低鹽高PH值下與核酸分離的原理,再通過移動磁珠或轉(zhuǎn)移液體來實(shí)現(xiàn)核酸的整個提取純化過程。由于其原理的獨(dú)特性,所以可設(shè)計(jì)成很多種通量,既可以單管提取,也可以提取8-96個樣本,且其操作簡單快捷,一批次上機(jī)提取時間為9~40min(不同樣本不同廠家時間不同),大大提高了實(shí)驗(yàn)效率,且成本低廉,因而可以在不同實(shí)驗(yàn)室使用,是目前市場上的主流儀器。

磁珠法自動核酸提取儀又分為磁棒法和抽吸法

1.2.1

抽吸法

顧名思義,抽吸法就是通過自動移液裝置來進(jìn)行。磁鐵分為2種裝置,磁鐵在底部和側(cè)面。抽吸法最大的問題在于,為了在去除廢液的時候不抽走磁珠,移液器不能靠磁珠太近,以防磁珠連同廢液被抽掉。1)磁鐵在底部的裝置,因?yàn)榇胖楸淮盆F吸附在底部,這樣漂洗液就不能完全去除,殘留的漂洗液中的鹽和乙醇會影響后面的洗脫效率和PCR成功率;2)磁鐵在側(cè)面的裝置殘留的液體會少些,但是洗脫的效率也不好,依靠DNA自行溶解到洗脫緩沖液中,除非等上半小時以上,所以有些96自動核酸提取工作站,提取一輪的時間需要150分鐘,32磁棒法的同樣的時間可以提5輪了。

1.2.2

磁棒法核酸提取儀

通量通常有8、16、32、96通道,磁棒只帶走磁珠,轉(zhuǎn)移到下一個步驟相應(yīng)的反應(yīng)孔中,另外選擇磁棒法的提取儀器最好要功能更齊全的,比如可以加熱,每個加熱槽最好獨(dú)立溫控,這樣可以設(shè)置加熱、裂解、洗脫的不同溫度,另外很重要的一點(diǎn)是,帶動磁棒的電機(jī)要能帶動磁棒進(jìn)行液體的快速混勻和攪拌,這樣才有利于自動化和有助于裂解和漂洗徹底。

磁棒法核酸提取儀混勻方式

1)    震蕩混勻:通過磁棒的上下震動混勻磁珠和核酸,為市面上主流方法

2)    旋轉(zhuǎn)混勻:通過磁棒的旋轉(zhuǎn)混勻磁珠和核酸,相比傳統(tǒng)的振蕩式混勻技術(shù),氣溶膠的產(chǎn)生量大幅降低50%以上。交叉污染而導(dǎo)致的假陽性風(fēng)險(xiǎn)被更有效控制,進(jìn)一步保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。另外,旋轉(zhuǎn)的混勻方式最大限度的保留了DNA的長鏈,減少核酸機(jī)械的斷裂,提高后續(xù)檢測的靈敏度。

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