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紫外分光光度計(jì)的應(yīng)用
發(fā)布日期:2022/11/29 9:43:16
應(yīng)用
高含量組分測(cè)定-示差法
當(dāng)待測(cè)組分含量較高時(shí),測(cè)得的吸光度值常常偏離朗伯-比爾定律。即使不發(fā)生偏離,也因?yàn)橥ǔ2捎眉內(nèi)軇┳鲄⒈热芤海ㄆ胀ü舛确ǎ?,使測(cè)得的吸光度太高,超出適宜的讀數(shù)范圍而引入較大的誤差。采用示差法就能克服這一缺點(diǎn)。但應(yīng)用示差法時(shí),要求儀器光源有足夠的發(fā)射強(qiáng)度或能增大光電流放大倍數(shù),以便能調(diào)節(jié)參比溶液透光度為100%。
這就要求儀器單色器質(zhì)量高,電光學(xué)系統(tǒng)穩(wěn)定性好。
多組分分析
應(yīng)用紫外可見分光光度法,常??赡茉谕辉嚇尤芤褐胁贿M(jìn)行分離而測(cè)定一個(gè)以上組分。假定溶液中同時(shí)存在兩種組分x和y,其吸收光譜一般有重疊和不重疊兩種情況。不重疊的測(cè)定組分相互不產(chǎn)生干擾。若吸收光譜重疊,在波長為λ1和λ2時(shí)分別測(cè)定吸光度A1和A2,由吸光度值的加和性得到聯(lián)立方程,通過解聯(lián)立方程求得各濃度值。
定量方法
紫外可見分光光度分析的定量依據(jù)是光吸收定律,但具體操作方法卻有多種
標(biāo)準(zhǔn)曲線法
即工作曲線法,適用于大量重復(fù)的樣品分析,是工廠控制分析中應(yīng)用最多的方法。
根據(jù)光吸收定律,對(duì)于一種有色化合物,ε是一個(gè)定值,若把光程L也固定,那么吸光度A就和溶液的濃度c成正比,也就是說吸光度A和濃度c呈線性關(guān)系。配制一系列適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,顯色后分別測(cè)定其吸光度,把吸光度A對(duì)濃度c作圖,即得工作曲線。
直接比較法
直接比較法其實(shí)質(zhì)也是工作曲線法,是一種簡(jiǎn)化的工作曲線法。配一個(gè)已知被測(cè)組分濃度為cs的標(biāo)樣,測(cè)其吸光度為As,在同樣條件下再測(cè)未知樣品的吸光度為Ax,通過計(jì)算可求出未知樣品的濃度cx。
As=εcsL
Ax=εcxL
由于溶液性質(zhì)相同,比色皿厚度一樣,所以As/Ax=cs/cx
式中:
cs-已知被測(cè)組分的濃度,mol/L;
cx-未知樣品的濃度,mol/L;
As-已知被測(cè)組分的吸光度;
Ax-未知樣品的吸光度。
直接比較法簡(jiǎn)化了繪制工作曲線的步驟,適用于個(gè)別樣品的測(cè)定。

操作時(shí)應(yīng)注意配制標(biāo)樣的濃度要接近被測(cè)樣品的濃度,這樣能減少測(cè)量誤差。

 標(biāo)準(zhǔn)加入法
標(biāo)準(zhǔn)加入法是工作曲線的一種特殊應(yīng)用。選擇適當(dāng)?shù)娘@色條件,先測(cè)定濃度為cx的未知樣品吸光度為Ax,再向未知樣品中加入一定量的標(biāo)樣,配置成濃度為cx+Δc1、cx+Δc2……一系列樣品,分別顯色后再測(cè)定吸光度為A1、A2……最后在坐標(biāo)紙上繪圖,以吸光度A為縱坐標(biāo),以濃度c為橫坐標(biāo),分別畫出Δc1、Δc2所對(duì)應(yīng)的A1、A2等各點(diǎn),連成直線后延長,與橫軸的交點(diǎn)cx也就是未知樣品的濃度cs。
應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)加入法時(shí)要注意,加入的標(biāo)樣濃度要適當(dāng),使畫出的曲線保持適當(dāng)角度,濃度過大或過小都會(huì)帶來測(cè)量誤差。這種方法操作比較麻煩,不適于作系列樣品分析,但它適用于組成比較復(fù)雜,干擾因素較多而又不太清楚的樣品,因?yàn)樗芟尘暗挠绊憽?/span>
紫外可見分光光度計(jì)使用中的注意點(diǎn)
保護(hù)光源
光源燈有一定的壽命,儀器不工作時(shí)不要開燈,若工作間歇時(shí)間短,可不關(guān)燈。
一旦停機(jī),則要待燈冷卻后再重新啟動(dòng),并預(yù)熱15min。
燈泡發(fā)黑或亮度明顯減弱或不穩(wěn)定時(shí),就及時(shí)更換。
經(jīng)經(jīng)紫外光照射后形成結(jié)痕可用無水乙醇去除。
保證合適的工作環(huán)境
溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。
不適宜的溫度和濕度可引起機(jī)械部件的銹蝕,使金屬鏡面的光潔度下降,引起儀器機(jī)械部分的誤差或性能下降。造成光柵、反射鏡、聚焦鏡等光學(xué)部件的鋁膜銹蝕,產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等。甚至使儀器停止工作,從而影響儀器壽命。維護(hù)保養(yǎng)時(shí)應(yīng)定期加以校正溫度和濕度。實(shí)驗(yàn)室,特別是地處南方地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室,應(yīng)具備四季恒溫的儀器室,配備恒溫設(shè)備。環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體也可以影響機(jī)械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關(guān)、按鍵、光電耦合器的可靠性,也是造成光學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因之一。因此必須定期清潔,保障環(huán)境和儀器內(nèi)衛(wèi)生條件,防塵。
定期除塵、調(diào)校
儀器使用一定時(shí)間后,內(nèi)部會(huì)積累一定量的塵埃,最好由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開啟儀器外罩對(duì)內(nèi)部進(jìn)行除塵工作,同時(shí)將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固,對(duì)光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔,必要時(shí)對(duì)光路進(jìn)行校準(zhǔn),對(duì)機(jī)械部分進(jìn)行清潔和必要的潤滑,最后恢復(fù)原狀,再進(jìn)行一些必要的檢測(cè)、調(diào)校和記錄。
正確使用比色皿
拿比色皿時(shí),手指只能捏住比色皿的毛玻璃面,不要碰比色皿的透光面,以免沾污。清洗比色皿時(shí),先用水沖洗,再用蒸餾水洗凈。若被比色皿被有機(jī)物沾污,可用鹽酸-乙醇混合洗滌液(1:2)浸泡片刻,再用水沖洗。每次做完實(shí)驗(yàn)應(yīng)立即洗凈比色皿。比色皿外壁的水用擦鏡紙或細(xì)軟的吸水紙吸干,以保護(hù)透光面。測(cè)定有色溶液吸光度時(shí),一定要用有色溶液洗比色皿內(nèi)壁幾次,以免改變有色溶液的濃度。在測(cè)定一系列溶液的吸光度時(shí),通常都按由稀到濃的順序測(cè)定,以減少測(cè)量誤差。
若分光光度計(jì)噪音比較大,有可能是光源燈泡使用時(shí)間超過壽命期,可更換光源燈泡。

若自檢時(shí)提示波長自檢出錯(cuò),有可能是自檢過程中打開過儀器樣品室的蓋子,可關(guān)上儀器樣品室蓋子,重新自檢。

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